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发表SCI｜这 18 支抗体可帮你完成小鼠MSC细胞的鉴定

作者：北京博奥森生物技术有限公司 2021-12-24T09:10 (访问量:2670)





Bioss被引用产品：
文中采用了我公司19个产品，其中18个抗体产品用于实验中提取并培养的小鼠MSC细胞的鉴定：WB、免疫组化及免疫荧光染色，1个产品用于细胞核染色，使实验顺利进行。进一步佐证了基质刚度对巨噬细胞脂质代谢有直接的机械影响，并为SPMs在骨再生中的临床应用提供了新的见解。


文章信息


发表期刊：Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications

影响因子 (IF) ：7.327

文章名称：Matrix stiffness regulates bone repair by modulating 12-lipoxygenase-mediated early inflammation（点击获取全文）

作者：Dongdong Yao

作者单位：重庆大学

本文应用 Bioss 产品：

1.Anti-CD11b | bs-1014R
2.Anti-CD34 | bs-0646R
3.Anti-Integrin beta 1/CD29 | bs-20630R
4.Anti-CD44 | bs-4916R
5.Anti-CD45 | bs-4819R
6.Anti-CD90 | bs-20640R
7.Anti-CD105 | bs-0579R
8.Anti-Integrin beta 1 | bs-0486R
9.Anti-IL-4 | bs-0581R
10.Anti-IL-6 | bs-0782R
11.Anti-IL-10 | bs-0698R
12.Anti-TNF alpha | bs-0078R
13.Anti-12-LOX | bs-3874R
14.Anti-iNOS | bs-0162R
15.Anti-beta-Actin | bsm-33036M
16.Anti-osteopontin | bs-0026R
17.Anti-Osteocalcin | bs-0470R
18.Anti-FITC | bs-0366R
19.DAPI | D-9106











文章摘要
巨噬细胞的脂质代谢在发挥抗炎作用和加速骨折愈合中起到重要作用。12-LOX (12-脂氧合酶) 在包括巨噬细胞在内的多种细胞类型中表达，PUFAs（氧化多不饱和脂肪酸）产生促炎和抗炎脂质介质，其中 n-3 PUFAs 在组织稳态及纤维化中起重要作用。虽然有研究发现机械因素能调节炎性细胞的脂质代谢轴，特别是基质硬度会影响巨噬细胞代谢反应，但对基质硬度如何影响骨修复中 12-LOX 介导的早期炎症尚不明确。本研究通过控制脱钙时间0小时（对照组）、1小时（高）、12小时（中）和5天（低）来构建具有不同基质硬度的 DBM（脱钙骨基质）支架，以修复缺损的大鼠颅骨。分析炎症细胞因子的表达和巨噬细胞的极化，检测基质刚度调节的脂质代谢产物和脂质介质的生物合成。
图1. 炎症促进骨修复、骨重建 图片来源：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2214031X17300128 侵删



研究背景

由创伤、感染和肿瘤引起骨缺损的机制很复杂，目前尚未被完全了解。骨缺损早期炎症能够促进血管化，晚期炎症能够促进骨修复。但过度发炎会加速骨组织的破坏和吸收，所以炎症消退有维持骨组织稳态的重要作用。

巨噬细胞在骨再生过程中的早期炎症中有着重要作用，如清除有机碎片和重建细胞外基质 (ECM)。研究发现，由脂质代谢轴产生的专门的促分解脂质介质 (SPMs) 有助于炎症的缓解。巨噬细胞中的脂质代谢可产生游离脂肪酸，如 n-3 多不饱和脂肪酸 (n-3 PUFAs)，可促进小鼠骨折愈合，对关节炎和牙周炎也有良好的治疗作用。
在巨噬细胞中表达的 12-LOX (12-脂氧合酶) 是 LOX（脂氧合酶）家族的成员，能够将花生四烯酸 (AA) 和其他多不饱和脂肪酸 (PUFAs) 催化代谢为脂质介质。研究表明 12-LOX 能够影响骨密度，促进巨噬细胞活化，是治疗骨折、骨质疏松症和动脉粥样硬化性血栓形成等疾病的新靶点。12-LOX 是 MaR1 生物合成的关键酶，在炎症调节中起关键作用，并具有抗血栓形成的作用。
目前已经证实随着组织稳态/纤维化的发展，机械因素可以调节炎症细胞的脂质代谢轴。有研究表明，伸展运动（如太极、瑜伽）可以降低血液中 IL-6（白细胞介素-6）的水平。通过张力负荷模型发现，张力可以通过增加大鼠结缔组织中促分解脂质介质的水平来减缓中性粒细胞的迁移并减轻急性炎症。此外，异常的阻力运动可在 24 h 内升高人血清中二十碳三烯酸 (EPA)、血管紧张素转换酶 1(RVD 1)、E1 分解素 (RvE1)、白三烯和前列腺素 (PG) 的水平。综上所述，机械因素可能激活巨噬细胞中的 12-LOX 通路，从而影响脂质介质的生物合成。
巨噬细胞作为脂质前体的储存库，能够产生脂质介质。巨噬细胞受化学刺激因子的调节，生物材料的物理性质（如形貌、孔径）能够影响早期骨修复中的巨噬细胞亚型。骨是胶原纤维和羟基磷灰石的复合物，其基质硬度不仅能维持骨生物力学性质、稳定性，还能调节内源性间充质干细胞 (MSCs) 的成骨作用。并且基质硬度会影响巨噬细胞的极化状态、弹性和吞噬功能。虽然巨噬细胞对底层基质硬度的功能表型反应可能在骨修复中起着至关重要的作用，但关于基质硬度如何影响 12-LOX 介导的早期炎症，目前尚不明确。

因此，可以假设 12-LOX 通路能通过影响巨噬细胞的行为，在基质硬度调节的早期炎症过程中促进成骨。研究表明，不同基质刚度的脱矿骨基质 (DBM) 支架可以满足骨移植的需要。然而，从巨噬细胞代谢反应的角度来看，基质硬度是调节炎症反应信号的方法尚不明确。因此，该研究旨在探讨基质刚度如何通过调控 12-LOX 介导的早期炎症调节骨修复。

实验设计
小鼠 MSC 细胞及 264.7 细胞经过分离、培养和鉴定后用于本实验。制备不同基体刚度 DBM 支架用于本实验。构建直径为 5 毫米、厚度为 2 毫米的支架用于细胞实验；构建直径为 5 毫米、厚度为 1 毫米的支架用于动物实验。将大鼠分组后进行实验，每组至少 3 只，将所有大鼠随机分为以下 8 组：纯脱细胞骨支架（对照组）、高基质刚度支架（高）、中基质刚度支架（中）、低基质刚度支架（低）、自体移植物组、自体修复组和正常组。大鼠麻醉进行剃须和消毒后，在大鼠颅盖上方的颅骨中线处做一个 1.5 厘米的切口。角质层、皮下筋膜和骨膜被一层一层剥离，露出颅骨。大鼠颅骨缺损模型通过在颅骨斜缝两侧钻孔。完成后，骨膜直接与皮肤缝合。连续 3 天肌肉注射 400,000 U/kg 的青霉素，术后 1 天、3天、7 天、14 天和 3 个月处死大鼠进行动物实验分析，建立大鼠颅骨缺损模型。对制备好的实验样本进行 WB（蛋白质印迹法），Immunological staining（免疫染色），Alkaline phosphatase (ALP) assay（碱性磷酸酶测定），Histological staining（组织染色），High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometery (HPLC-MS/MS)（高效液相色谱-串联质谱法）分析。
图2. 扫描电子显微镜 (SEM) 下的 DBM 支架视图

图片来源：https://www.researchgate.net/figure/Gross-view-and-SEM-examination-of-the-DBM-scaffold-A-Gross-view-of-the-DBM-scaffold_fig1_321846235 侵删




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