线粒体

线粒体是细胞的能量工厂，是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供了能量，细胞生命活动所需的能量95％来自线粒体。除了为细胞供能外，线粒体还参与细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。因此，线粒体、线粒体膜等检测是研究细胞必不可少的一部分。

线粒体膜电位的定义与重要性

线粒体膜电位是线粒体内膜两侧电荷分布的结果，是维持线粒体正常功能的关键因素。在线粒体中，电子传递链通过氧化还原反应产生质子梯度，驱动ATP的合成。线粒体膜电位的稳定性直接关系到细胞的能量供应及其存活状态。大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。因此，线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

JC-1探针的工作原理

JC-1是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。 

正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜极性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去极化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。故而可以通过检测绿色和红色荧光检测线粒体膜电位的变化。

JC-10——JC-1的替代品

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稳定

JC-10具有更小的检测偏差，因为它在水性介质中具有更高的溶解度和更高的灵敏度。

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增强信号

JC-10具有比JC-1更高的信号背景比。

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增强的灵敏度

在所有检测细胞系中，JC-10能够比JC-1更好地检测线粒体跨膜电位损失的细微变化。

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广泛的应用

JC-10可用于原代大鼠肝细胞。

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方便

JC-10与荧光酶标仪、细胞成像仪和流式细胞仪兼容。

结果分析

检测JC-1单体时可以把激发光设置为490 nm，发射光设置为530 nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590 nm。用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FL-1通道检测，红色荧光通过FL-2通道检测。FL-1+，FL-2+为正常细胞，FL-1+，FL-2-为凋亡细胞。

操作不疑惑

Q：JC-1线粒体膜电位荧光探针，这个产品可以做组织切片染色吗？
A：把活体组织消化成单个细胞，保证细胞的活性，再进行染色。
Q：JC-1染色前，可以先固定细胞吗？
A：不可以，JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位的。固定会破坏电势，导致探针无法聚集在线粒体上，而失去特异性。
Q：JC-1工作液有聚集颗粒，打算染色前用离心的方法去除后再使用，离心的参数有推荐吗？
A：可以用13000 g 离心JC-1工作液约1-2分钟 。

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