传统的体内血管生成实验方法包括角膜微囊袋实验、肠系膜实验、海绵/基质植入、圆盘分析（DAS）、斑马鱼等。然而，这些实验不仅技术要求高、成本昂贵、耗时，还涉及伦理问题。与体内血管生成实验相比，在体外通过特定基质维持细胞生成的血管是一种更经济、更实用的实验方法。其中，最常用的支持细胞生长的基质是从EHS小鼠肿瘤中提取的基质胶，即Arcegel Matrix Gel。

Arcegel Matrix Gel的主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原、肝素硫酸蛋白多糖（HSPG）、纤维连接蛋白，以及TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织型纤溶酶原激活剂等生长因子，这些生长因子是EHS肿瘤固有的。它为组织和细胞提供支持、拉伸强度和支架支持，作为细胞粘附和移动的三维亚结构，并作为生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库。此外，它还作为细胞形态和分化的信号分子。由Arcegen Biotechnology开发和生产的Arcegel Matrix Gel不含LDEV（乳酸脱氢酶升高病毒），内毒素含量极低，并且已经过支原体检测以确保无污染，包括不同类型如基础浓度、高浓度、低生长因子等的基质胶。
 

应用指南

产品特点

高安全性：无LDEV（乳酸脱氢酶升高病毒）

多种浓度：浓度范围从8到20毫克/毫升

出色的批间稳定性：严格的生产质量检验流程确保不同批次之间的性能稳定

低内毒素：内毒素含量 ≤ 4 EU/毫升

污染物检测：经检测无支原体、细菌和真菌残留

高批次产量：批次产量高于L级水平

良好的兼容性：与任何类型的细胞培养基兼容
 

血管生成实验

基质胶的制备

1. 在实验前一天，从冰箱中取出Arcegel基质胶，并在4°C的冰箱中解冻过夜，同时预冷将要使用的耗材。

2. 在实验前，将Arcegel基质胶始终保持在冰盒中。

3. 打开血管生成载体载玻片的包装，取出载玻片。

4. 向每个孔中加入10 μl的Arcegel基质胶，确保胶体垂直添加在内孔上方，以防止残留胶体流过上孔。

凝胶化

1. 用盖子盖住载体载玻片，准备一个10 cm的培养皿，并在内部放置一块湿纸巾，以创建湿润的环境。

2. 将载体载玻片放入培养皿中，并用培养皿的盖子盖住。

3. 将整个培养皿放入CO2培养箱中，静置约30分钟以进行凝胶化，同时准备细胞悬浮液。

 细胞接种

1. 将消化后的细胞制备成浓度为2×10^5细胞/ml的悬浮液，并充分混合。

2. 取出已固化的载体载玻片。

3. 向每个孔中加入50 μl的细胞悬浮液，确保移液枪头垂直于上孔，不接触下孔中的胶体。

4. 添加细胞培养基，盖上盖子，静置一段时间后，所有细胞将沉降并附着在基质胶的表面。
 

图像采集
根据细胞生长速率定期观察并拍照，保留图像。

免疫荧光染色（可选）

1. 小心地从孔中移除培养基，不要触碰凝胶或细胞网络。将钙黄绿AM在无血清培养基中稀释至最终浓度为6~8 µg/ml。

2. 将细胞染色溶液加入以完全浸没细胞，并在室温下避光孵育30~40分钟。

3. 用PBS洗三次，缓慢地向上方孔中加入PBS以避免细胞脱落。

4. 使用激发波长Ex=485 nm和发射波长Em=529 nm进行荧光观察。
 

结果分析

测量并记录管状长度、覆盖面积、环数和节点数，并进行统计分析。

图：血管生成结果

图：血管的免疫荧光染色

常见问题解答

1. 收到的基质凝胶颜色变化（从浅黄到深红）的原因是什么？
对于含有酚红的基质凝胶，颜色变化的主要原因是酚红与碳酸氢盐和二氧化碳之间的相互作用，但当与5%的二氧化碳达到平衡时，颜色差异会减小。解冻后，轻轻摇晃试剂瓶，使基质凝胶均匀分散。

2. 处理基质凝胶时应采取哪些预防措施？
所有操作都应在无菌条件下进行，并使用预冷的移液枪头，以确保基质凝胶均匀分散。

3. 基质凝胶应如何分装、冷冻和使用？
解冻后，Arcegel基质凝胶可以分装到多个预冷的小冷冻管中。所有分装都应使用预冷的冷冻管，快速冷冻，并储存以避免反复冻融。使用过程中涉及的所有物品都应预冷，包括处理基质凝胶时使用的预冷移液枪头、枪头和管子。
 

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