人促血管生成素配体4 ELISA检测试剂盒
产品名称： 人促血管生成素配体4 ELISA检测试剂盒
英文名称： Human Angiopoietin-like 4 ELISA KIT
产品编号： SEKH-0091
产品价格： 0
产品产地： 北京
品牌商标： solarbio
更新时间： 2025-12-22T13:21:18
使用范围： null
北京索莱宝科技有限公司
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Human Angiopoietin-like 4 ELISA KIT
品牌：Solarbio | 货号：SEKH-0091
| 中文名称 | 人促血管生成素配体4检测试剂盒 |
|---|---|
| 英文名称 | Human Angiopoietin-like 4 ELISA KIT |
| 反应性 | Human |
| 样品类型 | Serum, plasma, Cell culture supernatant |
| 灵敏度 | 0.625 ng/ml |
| 检测目标 | Angiopoietin-like 4 |
| 应用 | Sandwich ELISA |
背景介绍：
人促血管生成素配体 4（Human Angiopoietin-like 4）是由肝脏及脂肪组织分泌的分子量为 55kDa 的糖
蛋白，它与血管生成素的结构有关。该分子 N 端含有卷曲螺旋结构域，C 端为纤维蛋白原样结构域，可在
体内直接水解。成熟的人促血管生成素配体 4 与人促血管生成素配体 1、2、3、5、6、7 的氨基酸序列同源
性为 26%-30%，与小鼠和大鼠的氨基酸序列同源性为 75%。N 端的卷曲螺旋结构域未被糖基化，能够形成
二硫键，该结构域可直接抑制脂蛋白脂肪酶的活性，从而提高体内循环的甘油三酯水平。N 端结构域的功
能为血管生成抑制剂，而 C 端结构域通过调节细胞粘附提高角质细胞的迁移及创伤修复，除此之外，人促
血管生成素配体 4 还可提高造血干细胞及间充质干细胞的存活能力。
检测原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人 Human
Angiopoietin-like 4 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样
本中的人 Human Angiopoietin-like 4 会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗人 Human
Angiopoietin-like 4 抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人 Human Angiopoietin-like 4
发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高
强 度的 非 共价 结合 ； 洗板 后 加入 显色 剂 底物 TMB ， 若反 应 孔中 样品 存 在不 同 浓度 的人 Human
Angiopoietin-like 4，则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会
变成黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的人 Human
Angiopoietin-like 4 浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人 Human
Angiopoietin-like 4 的浓度。
注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶
盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹
打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的
试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。
安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试
剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物
实验室安全防护有关管理规定执行。
自备实验器材（不提供，可代购）
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板机或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 双蒸水，去离子水，量筒等
6． 稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并
于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于
4 Tel: (+86) 010 56371202 Web: www.solarbio.net
DESCRIPTI
ON
-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混
合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24
小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
※注意：血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高
于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
试剂准备：
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入
37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释
成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后轻
轻混匀(浓度为80ng/ml)，然后在其余七管中各加入500L标准品/样本稀释液（SR1），按照以下浓度进
行2倍稀释：80、40、20、10、5、2.5、1.25、0 ng/ml进行稀释。80ng/ml为标准曲线最高点浓度，标准
品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点（0ng/ml）。复溶过的标准品原液（80ng/ml）未用完的应废
弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。
6. 洗涤方法：
自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/孔,注入与吸出
间隔为 30 秒，洗板 5 次。
手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔，静止
30 秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。
结果判断：
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请
用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中Human Angiopoietin-like 4 含
量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
2. 灵敏度：
最低可检测人 Human Angiopoietin-like 4 浓度达 0.5ng/ml，
20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。
3. 特异性：
不与人 Angiopoietin-1、Angiopoietin-2、Angiopoietin-4、Angiopoietin-like 3 反应，小鼠 Angiopoietin-3、
Angiopoietin-like 3 反应。
4. 重复性：
板内，板间变异系数<10%。
