产品简介

本产品适用于从动物组织（肝脏、肾脏、脾脏、皮肤等）和细胞中提取总RNA。采用独特的磁珠及深度优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，提取的核酸适用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译、文库构建等实验。本产品配合自动化核酸提取仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

组分信息

储存条件

1. Part I组分室温运输，室温保存，有效期1年。
2.  Part II 组分冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。
3. 收到货后，请检查Part I、Part II共2个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

使用说明

1. E组分洗涤液请在使用前请按照标签说明加入对应无水乙醇。
2. 操作前请在裂解液中加入PT液至终浓度为1%，如1 mL中加入10 μL PT液，配制好的裂解液可在4℃保存一周。
3. PT液在-20℃中为冷冻状态，室温溶解后会有微量结晶，可涡旋混匀，待试剂完全溶解后使用。

搭配AP-48 N 核酸提取仪自动化提取

1. DNA酶消化液配制：

1.1 常规样本，如肝脏，肾脏，脾脏和心脏等样本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87μL DEPC水，轻柔吹打混匀，将配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暂存放于4℃。

1.2 微量样本，如微量脑组织：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7μL DEPC水，轻柔吹打混匀，将配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暂存放于4℃。

1. 样本前处理：

2.1 组织样本：在离心管中加入450 μL裂解液（确认已加入PT液），称取10-15 mg液氮研磨后的组织样本（肝脏及脾脏投入量小于10 mg），涡旋混匀后室温静置5 min得到样本裂解液。若有少量组织碎块，可用移液枪枪进行吹打。

2.2 悬浮细胞：取不超过500万细胞样本，1000rpm 4℃离心去除上清。在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。

2.3 贴壁细胞：使用胰酶将贴壁细胞进行消化并低速离心去除上清，在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。若细胞量小于1×10^6,，可直接去除孔板内培养基，向其中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。

1. 取出预封装 96 深孔板，充分颠倒混匀，使用96孔板离心机短暂离心（或手甩），防止挂液。使用前小心撕去铝箔封口膜，防止液体溅出。
2. 将配制完成的DNA酶消化液加入到96深孔板中第4、10列。
3. 将处理好的样本裂解液加入样本处理孔（第1、7列）并吹打混匀3-5次。
4. 按照提取仪的位置，正确安放上述96孔预装板，并放置8联磁棒套。
5. 提取常规样本请按照下表进行程序设置，启动运行，中间机器蜂鸣后将深孔板拿出，向第4、10列中加入700 μL洗涤液并将其放回原位，启动程序继续运行。程序结束后，洗脱孔（第5、11列）中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将洗脱液转移至干净的RNase-free离心管中，溶液可置于-80℃保存。注：若样本为微量样本，如提取总量小于5万的细胞样本，可将步骤8中温度设置为65℃来增大核酸得率。

AP-48N自动核酸提取仪提取程序

混合模式1：混合速度200000，混合时间10 s;

混合模式2：混合速度300000，混合时间10 s;

混合模式3：混合速度50，混合时间10 s。

1. 较难提取样本，如皮肤样本等请按照下表进行程序设置，启动运行，中间机器蜂鸣后将深孔板拿出，向第4、10列中加入700 μL漂洗液并将其放回原位，启动程序继续运行。程序结束后，洗脱孔（第5、11列）中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将洗脱液转移至干净的RNase-free离心管中，溶液可置于-80℃保存。

AP-48N自动核酸提取仪提取程序

注意事项

1. 预装板组分如有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可45℃加热至溶液澄清。

2. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。

3. 冻存样品避免反复冻融，否则会导致样品中核酸的质量下降。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

Ver.CN20240722