产品说明
半乳糖(c6h12o6)是一种存在于乳制品，甜菜，树胶和糖浆中的单糖。其在哺乳动物体内合成并以糖脂和糖蛋白的形式存储于若干组织中。当与葡萄糖结合就形成双糖乳糖。简单，直接和高通量的半乳糖浓度检测方法被广泛地应用。博世生物技术公司的半乳糖测试盒使用特殊的酶促反应形成有色产物。反应产物的吸光强度(570nm)或荧光强度(585/530nm)与样品中半乳糖的浓度成正比。
产品特点
只须20mL样品。96-孔板线性检测范围：比色法10-1000 mM，荧光法 10 -100 mM半乳糖。
适用范围
直接检测：生物样品如血清、血浆、尿液、唾液、乳汁、培养基中的半乳糖。
药物开发/药理学：药物对半乳糖代谢的影响。
食品和饮料： 检测食品和饮料中的半乳糖浓度。
试剂盒组成(96孔板供100份检测)
   缓冲液： 10  mL           酶试剂：120 mL       
   显色剂：120 mL            标准液：1 mL  10 mM半乳糖溶液
   贮藏条件：试剂盒应用干冰运输，所有试剂均于-20°C保存。签收后3个月内有效。
注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
比色法检测
注意: (1)甘油和含巯基的试剂(如β-巯基乙醇，二硫苏糖醇> 5 mM)可干扰这项检测 ，故应在样品准备过程中避免使用。(2)此法是基于动力学反应，为了确保相同的培养时间，向标准品和样品中添加工作试剂应迅速，混合应迅速完全，推荐使用多通道移液器。
样品准备: 血清和血浆样品可直接测验。牛奶样品应按100 mL 6N HCl和600 mL milk的比例混合，以14000rpm的转速离心并转移上清液到一洁净管，每毫升上清液添加170 mL 6N NaOH中和。并再以14000rpm的转速离心。取上清液检测。在此过程中稀释系数n = 1.36。
1. 将所有试剂放置至室温。检测过程中将已解冻的酶试剂始终置于冰箱内或者冰上。
2. 标准品和样品: 将40mL 10mg/dL标准液与360mL 蒸馏水dH2O混合制备400mL1000mM标准品。用dH2O稀释标准品，比例如下：
No
1000 mM STD  +  H2O
Vol (mL)
Galactose (mM)
1
100 mL +    0 mL
100
1000
2
   80 mL +  20 mL
100
  800
3
   60 mL +  40 mL
100
  600
4
   40 mL +  60 mL
100
  400
5
  30 mL +  70 mL
100
  300
6
  20 mL +  80 mL
100
  200
7
  10 mL +  90 mL
100
  100
8
    0 mL +100 mL
100
      0
 
转移20 mL标准和样品至每个孔内。
3. 反应:  对每个反应孔按85 mL 缓冲液, 1 mL 酶试剂(在移液前稍微摇晃), 和1 mL显色剂的比例配制足量工作试剂，向每孔
加入80 mL工作试剂。轻轻振荡混匀, 室温下培养20分钟。
 4. 读取570nm波长处(波长范围550-585nm)的吸光度。
荧光法检测
对于荧光法检测，线性检测范围为10 -100 mM半乳糖。将10 mL 10mM标准品与990 mL蒸馏水混合制备100mM半乳糖。用蒸馏水稀释得到100、80、60、40、30、20、10和0mM的标准品。
1.转移20 mL标准品和20 mL样品至黑色96孔板中各自的孔内。
2.添加80 mL工作试剂，轻轻振荡混匀。室温下培养20分钟。
3.读取荧光强度(585/530nm)
注意：(1)如果计算出样品中半乳糖的浓度高于1000 mM(比色法)或者100 mM(荧光法)，用水稀释样品并再次检测，用稀释系数n乘以结果。
浓度计算
从标准品的测值中减去空白对照的测值(水，#8)，绘制DOD或DRFU与标准浓度的曲线。测定斜率(Slope)并计算样品中半乳糖的浓度,
 
ODSAMPLE, ODH2O分别是样品和H2O的吸光度。RFUSAMPLE, RFUH2O 分别是样品和H2O的荧光强度，n是样品稀释系数。
单位换算：1 mM半乳糖相当于18 mg/dL, 0.018% or 180 ppm。
实验必需品(未提供)
移液器、离心管、透明平底96孔板、吸光度分析仪、黑色平底96孔板、荧光分析仪。