产品描述

Stbl2是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，适合于多种插入片段的化学转化。具有以下 Stbl2 化学感受态细胞特点：

① 更适于不稳定插入片段（正向重复序列，逆转录病毒序列等）的克隆；

② 更适于克隆慢病毒载体、甲基化的基因组序列；

③ 利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取；

④ 不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。

本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁹cfu/μg。

本品基因型：F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 。

 Stbl2 化学感受态细胞产品组分

运输与保存方法

干冰运输。

 Stbl2 感受态细胞-80℃保存，pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。

 Stbl2 化学感受态细胞注意事项

1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

 Stbl2 化学感受态细胞使用方法

1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置25min。

3）置于42℃水浴中热激45 s，然后快速将管转移到冰浴中，冷却2-3min，该过程不要摇动离心管，否则会降低转化效率。

4）向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于30℃摇床振荡培养90min（225rpm），目的是促使菌体复苏。

【注】：当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化Control pUC19 计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60min。

5）将上述复苏的菌液于5000rpm离心1min，留取100μl左右上清轻轻混匀菌液并涂布到含相应抗生素的SOC培养基上。

6）将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。

【注】：若转化control pUC19 计算转化效率，则需37℃培养过夜。